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原位杂交第三天
1 用1ml含10%热灭清的mabt溶液置换溶液,植物原位杂交,放置摇床上25分钟,然后用1mlmabt置换,25分钟,再用1mlmabt溶液置换,一小时以上,后用1mlmabt溶液置换,25分钟。
2 用1ml 1mm左旋米睉的staining buffer洗三次,每次放置五分钟。
3将胚胎转入十六孔板中,吸去staining buffer,加上300ul bm purple ap substrate(底物,湖北原位杂交,用之前加5mm左旋米唑),十六孔板外面包上锡箔纸以避光,避免摇动,室温下显色。
4每隔一小时观察胚胎是否开始显色
5将显色完全的胚胎中的底物吸出,用pbst洗两三次后加上4%---固定,拍照。
64c冰箱保存。
荧光原位杂交fish技术具有以下优点:
可多重染色:利用不同的荧光染料标记不同的探针,染色体原位杂交,可以实现多重荧光原位杂交,从而同时检测多个序列,提高实验效率了。
高度---性和性:fish技术不仅可以用于研究已知基因或序列的染色体定位,还可以用于未基因或遗传标记及染色体畸变的研究,在基因定性、定量、整合、表达等方面的研究中颇具优势。
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