原位杂交-武汉贝科新肽-原位杂交检测

同一样本可以多次做原位杂交实验吗?

一般情况下，如果操作没有得到理想的结果，是可以将探针洗涤然后进行再次的杂交的。如果使用的是直标型探针，还可以使用不同探针对同一样本进行反复杂交。针对不同的样本，处理方法略有不同。

原位杂交实操中哪些因素比较重要?

重要的因素：温度、光照、湿度和试剂的ph值。温度和湿度直接影响着探针和目标dna的杂交效率；光照影响着荧光染料的强度，所以探针要避光保存，其已经杂交的片子可用防荧光淬火剂封片且避光保存；各种试剂ph也要达到要求，原位杂交，这也直接关系到原位杂交的稳定性。

原位杂交第三天

1        用1ml含10％热灭清的mabt溶液置换溶液，放置摇床上25分钟，然后用1mlmabt置换，原位杂交公司，25分钟，再用1mlmabt溶液置换，一小时以上，原位杂交检测，后用1mlmabt溶液置换，25分钟。

2        用1ml 1mm左旋米睉的staining buffer洗三次，每次放置五分钟。

3将胚胎转入十六孔板中，吸去staining buffer，加上300ul bm purple ap substrate(底物，用之前加5mm左旋米唑)，十六孔板外面包上锡箔纸以避光，避免摇动，室温下显色。

4每隔一小时观察胚胎是否开始显色

5将显色完全的胚胎中的底物吸出，用pbst洗两三次后加上4％---固定，拍照。

64c冰箱保存。