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预杂交
1每个管中置换成大约300ulhyb-溶液,60℃水浴5分钟,避免振荡。
2用等体积的hyb+取代hyb-。
360℃水浴,荧光原位杂交技术,预杂交4小时以上。
杂交
1吸去预杂交的hyb+,加上100ul已加入探针的hyb+溶液探针浓度约为1ng/ul..
260℃ 温浴过夜。
注:杂交与预杂交的温度可以是55到60度不等,原位杂交服务,温度越低,探针结合越好,原位杂交技术,温度越高,背景越小。
原位杂交技术可以应用于以下场景:
组织中---dna/rna的检测和定位。例如,可以用于检测eb---mrna、人类状瘤---和巨细胞---dna等。
癌基因、抑癌基因及其他各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测。
检测染色体的变化,如染色体数量异常和染色体易位等。
在植物基因组研究中的应用。例如,通过与特定基因序列的探针进行杂交,可以在植物染色体上定位到目标基因的位置,原位杂交,进而构建遗传图谱,为植物育种和基因组研究提供基础数据。
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